【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：犬細(xì)小病毒(CPV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

Name：Canine Parvovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）

【包裝規(guī)格】10T/盒       

【預(yù)期用途】

犬細(xì)小病毒（Canine Parvovirus, CPV）可引起犬的劇烈嘔吐、出血性腸炎、脫水、白細(xì)胞減少和心肌炎等癥狀。臨床上犬細(xì)小病毒病可分為腸炎型和心肌炎型，對(duì)犬造成很大危害。CPV有3種亞型，主要是在VP2蛋白上有基因差異，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c^[1]。感染CPV的犬主要通過(guò)糞便向外排毒，因此糞便是犬間傳遞感染的主要傳染源。CPV常規(guī)檢測(cè)方法主要有病毒分離鑒定、血凝和血凝抑制試驗(yàn)、ELISA和PCR等方法。PCR法靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，已被廣泛用于CPV診斷[^2-3]。

本試劑盒適用于檢測(cè)樣本中的犬細(xì)小病毒，用于犬細(xì)小病毒感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)犬細(xì)小病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)犬細(xì)小病毒的DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò)5次，有效期12個(gè)月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】病死犬可采集淋巴結(jié)、脾、肺、等組織；活犬可采集血液、血清、糞便等。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

【注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【參考文獻(xiàn)】

[1] Wang S J, Yang S T, Cheng C F, et al. Isolation and identification of canine parvovirus and sequence analysis of its VP2 gene [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2009, 10, 26.

[2]李英俊, 史利軍, 李剛, 等. 犬細(xì)小病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2010, 30(12): 1594-1597.

[3]劉海防, 胡傳偉, 謝之景, 等. 犬細(xì)小病毒Taqman熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2010, 29(1): 36-40

[4]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. GB/T 27533-2011 犬細(xì)小診斷技術(shù)[S].

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663

生產(chǎn)地址：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號(hào)G11棟201號(hào)

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